自噬的检测方法（二） - 知乎 - 知乎专栏
三、Western Blot检测LC3和p62蛋白的表达量. ① 利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成（图1）。自噬形成时， 胞浆型LC3-I 会酶解掉一小段多肽，随后跟PE结合转变为膜型的LC3-II。因此可以通过LC3-II/I比值的大小估计自噬水平的高低。 图1.
盘下这 7 点，自噬研究中检测 LC3 岂会那么难？！ - 知乎
LC3-I 通过 Atg7 和 Atg3（分别对应 E1 和 E2 样酶）参与的 泛素样反应 ，使磷脂酰乙醇胺 （PtdEth，PE）偶联，生成脂质化形式的 LC3，也称作 LC3-II，它可以附着到自噬体（autophagosome）的膜上，是 自噬体 的结构蛋白。
WB检测LC3 - 知乎 - 知乎专栏
LC3-I通过 Atg7 和 Atg3(分别对应E1和 E2样酶)参与的泛素样 反应，使 磷脂酰乙醇胺 (PtdEth,PE)偶联，生成脂质化形式的LC3，也称作 LC3-II，它可以附着到自噬体(autophagosome)的膜上，
【LC3跑WB方法】 - 丁香园论坛 - DXY.cn
今年10 月，CST 技术人员赴重庆某医院实验室演示了Western blot 的操作方法，现场进行了LC3 检测，得到实验结果如图4 所示，LC3-I 和LC3-II 条带清晰。 自噬是一个「流动」的过程，目前，检测自噬流的方法有很多，除了Western blot 外，还有电镜、长寿命蛋白降解实验，mRFP-GFP-LC3 双荧光系统等等，每一种实验方法都有其优缺点，所以，需根据实验目的选择合适的实验方法，或者使用多个独立的实验方法进行交叉论证，才能得到可靠的结论。 1. Vojo Deretic, …
关于『细胞自噬』，看这一篇就够了！ - 哔哩哔哩
3、Western Blot检测LC3和p62蛋白的表达量. ① 利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化评价自噬形成 （图8）。自噬形成时，胞浆型LC3-I会酶解掉一小段多肽，随后跟PE结合转变为膜型的LC3-II。因此可以通过LC3-II/I比值的大小估计自噬水平的高低。
Monitoring Autophagy Flux and Activity: Principles and …
2020年8月26日 · 4.1 Monitoring Autophagy Flux Using Western Blotting Analysis of LC3-II and p62. Monitoring endogenous LC3-II in vitro and in vivo by western blotting is the most popular assay for assessing autophagy flux (Figure 3A, lower part). Cultured cells grown with base medium (nutrient-rich) are transferred to fresh base medium or starvation medium in ...
Methods for the Detection of Autophagy in Mammalian Cells
We present four different methods that are widely used to analyze autophagy. Three methods are aimed to monitor autophagic flux, including LC3 turnover by immunoblotting (basic protocol 1), degradation of autophagic substrate p62 (alternative protocol 1) and tandem fluorescent-tagged LC3 assay (alternative protocol 2).
Monitoring autophagic degradation of p62/SQSTM1 - PubMed
Here, we present several protocols for monitoring autophagy-mediated degradation of p62 using Western blots, pulse-chase measurement of p62 half-life, immunofluorescence and immuno-electron microscopy, as well as live cell imaging with a pH-sensitive mCherry-GFP double tag.
Routine Western blot to check autophagic flux: cautions and ...
2015年5月15日 · At present, the analysis of autophagic flux by Western blotting (WB), which measures two of the most important markers of autophagy, i.e., microtubule-associated protein 1 light chain 3 (LC3) and p62, is widely accepted in the scientific community. In this study, we addressed the possible disadvanta …
LC3- and p62-based biochemical methods for the analysis of …
2015年3月15日 · Another widely used autophagy marker, p62, also called sequestosome 1 (SQSTM1), binds directly to LC3 and GABARAP (Atg8 orthologues) family proteins via a short LC3 interaction region (LIR). This may serve as a mechanism to deliver selective autophagic cargo for degradation by autophagy.